Metodologia de determinação de açúcares solúveis em tecido vegetal de cafeeiro por cromatografia gasosa

Abstract

A maioria dos trabalhos realizados com café (Livramento, 2003; Silva, 2000) até o presente utilizam a quantificação dos açúcares solúveis totais pelo método de antrona. Apesar desse método ser preciso, sensível e com ótima reprodutibilidade, este apresenta apenas um perfil quantitativo. Uma alternativa que forneça tanto o perfil qualitativo quanto o quantitativo é a cromatografia gasosa que possui uma alta eficiência e ótima resolução cromatográfica, além do custo da análise ser mais barata em relação à cromatografia líquida. O perfil contendo os diversos açúcares poderá subsidiar estudos de metabolismo, auxiliar nos programas de melhoramento e ser um dos parâmetros componentes da avaliação da qualidade de bebida. Além desses aspectos, essa técnica pode ser usada em Laboratórios de Certificação de Produtos e em café os estudos desta são muito escassos. Este trabalho preliminar objetivou quantificar os açúcares solúveis totais em café por GC. Basicamente, quanto à extração dos açúcares utiliza-se etanol 80%, incubação a 85°C por 5 minutos e centrifugação. O sobrenadante é usado para a análise dos açúcares e o precipitado pode ainda ser usado para determinação de amido. A purificação do extrato ocorre em colunas de troca iônica para remoção de aminoácidos e ácidos orgânicos, principalmente, e precipitação de proteínas com Ba(OH)2 e ZnSO4. Essa técnica, em relação ao método da antrona, requer um período maior de ajuste de metodologia, mas após a otimização dos parâmetros a quantidade de amostras analisadas por CG num sistema de rotina é muito alta.

The major papers published related to coffee (Livramento, 2003; Silva, 2000) until now used anthrone method for total soluble sugars quantification. Although this method is precise, sensitive and with excellent reproducibility, it shows only a quantitative profile. One alternative that could give qualitative and quantitative profile is a gaseous chromatography that has high efficiency and resolution, in addiction to this fact this technique is cheaper than HPLC. The profile containing the sugars could help the studies in metabolism, in breeding programs and could be one of the parameters to evaluate the beverage quality. In addition to these aspects, this technique could be used in Laboratory of Certification Products and in coffee these studies are scarce. This paper aimed to quantify the total soluble sugars in Coffee bud, shoot, leaf and fruit using GC. Basically the sugars were extracted with ethanol 80%, incubated at 85°C for 5 minutes and the slurry centrifuged. The supernatant was used to sugars analysis and the precipitate was used for starch determination. The extract purification was made in ion exchange columns to remove amino acids and organic, mainly the protein precipitation with Ba(OH)2 and ZnSO4. This technique, in relation to anthrone method needs an optimization process, bud after this step can analyze a large amount of samples per day.