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Bicho-mineiro do cafeeiro: Análise da digestão e inibição de tripsina por extratos de folhas de mamona
(Universidade Federal de Lavras, 2007-02-16) Rossi, Guilherme Duarte; Santos, Custódio Donizete dos
O café é uma cultura de grande importância social e econômica para o Brasil e sua produção é afetada por diversas pragas e doenças. Uma dessas pragas é o bicho-mineiro do cafeeiro Leucoptera coffeella (Guérin-Mèneville, 1842) (Lepidoptera: Lyonetiidae), que pode provocar grandes perdas na produção. As formas de controle do bicho-mineiro do cafeeiro conhecidas e utilizadas atualmente apresentam diversos inconvenientes, o que motiva a procura por novas formas de controle desse inseto. Um possível ponto de ataque às pragas visando ao seu controle é o uso de agentes inibidores de enzimas digestivas participantes da digestão primária. Os testes de inibição da tripsina foram escolhidos pelo fato de essa enzima participar da digestão primária de proteínas e seu mau funcionamento resultar na redução de aminoácidos disponíveis para o inseto. Utilizaram-se extratos de folhas de mamona, pois estudos preliminares com Erinnyis ello (Linneaus, 1758) (Lepidoptera: Sphingidae) mostraram a presença de um inibidor de tripsina em folhas de mamona. Objetivou-se com este trabalho estudar as enzimas digestivas do bicho-mineiro do cafeeiro e analisar a inibição de sua tripsina utilizando extratos de folhas de mamona. O experimento foi conduzido em Lavras-MG e analisaram-se as enzimas α- glicosidase (13,7 + 3,4 U/g de inseto; pH ótimo = 6,0), amilase (2,2 + 0,11 U/g de inseto; pH ótimo = 10,0), aminopeptidase (6,8 + 0,86 U/g de inseto; pH ótimo = 8,3), β-glicosidase (0,38 + 0,16 U/g de inseto; pH ótimo = 6,0), fosfatase ácida (0,79 + 0,19 U/g de inseto; pH ótimo = 5,5), sacarase (6,7 + 0,78 U/g de inseto; pH ótimo = 6,5), trealase (2,2 + 0,43 U/g de inseto; pH ótimo = 6,0) e tripsina (0,70 + 0,2 U/g de inseto; pH ótimo = 9,7). Pela análise dos pH ́s ótimos das enzimas, infere-se que o ambiente digestivo do bicho-mineiro do cafeeiro é muito semelhante ao dos demais lepidópteros. Pelos testes de inibição da atividade de tripsina do bicho-mineiro do cafeeiro, verificou-se uma inibição de aproximadamente 2,12 UTI/g de folhas frescas de mamona. Os procedimentos de purificação e os tratamentos de fervura e fervura mais adição de β- mercaptoetanol no extrato de folhas de mamona mostraram que o inibidor é uma molécula não-protéica e termorresistente, que foi purificada por cromatografia de adsorção (sílica gel 60) e analisado por espectrometria de massas.
Enzimas digestivas do bicho-mineiro do cafeeiro Leucoptera coffeella (GuérinMmèneville & Perrottet, 1842) (Lepidoptera: Lyonetiidae)
(Editora UFLA, 2009) Rossi, Guilherme Duarte; Santos, Custódio Donizete dos; Carvalho, Gislaine Aparecida; Corrêa, Angelita Duarte; Abreu, Celeste Maria Patto de; Carvalho, Geraldo Andrade
Os insetos possuem diferentes enzimas digestivas que catalisam as reações de hidrólise do alimento consumido e essas se diferenciam entre os insetos de acordo com suas dietas e estado fisiológico. Foram avaliadas as atividades de algumas enzimas digestivas da praga do cafeeiro - Leucoptera coffeella (Guérin-Mèneville & Perrottet, 1842) (Lepidoptera: Lyonetiidae) – popularmente conhecida como bicho-mineiro do cafeeiro, para o entendimento de seu processo digestivo. Lagartas do bicho-mineiro do cafeeiro foram coletadas em campo e em casa-de-vegetação. O extrato enzimático utilizado foi obtido pela maceração das lagartas em água (4oC). Determinaram-se os pH’s ótimos e as atividades das enzimas e -glicosidases, -amilase, aminopeptidase, fosfatase alcalina, sacarase, trealase e tripsina, incubando o extrato enzimático do bicho-mineiro do cafeeiro com substratos específicos. A análise dos resultados sugere que o processo digestivo e o ambiente intestinal do bicho-mineiro do cafeeiro sejam similares com o dos demais lepidópteros encontrados na literatura.
Inibição da tripsina de bicho-mineiro do cafeeiro por um fator não-protéico presente em extratos de folhas de mamona
(Editora UFLA, 2010-03) Rossi, Guilherme Duarte; Santos, Custódio Donizete dos; Cardoso, Maria das Graças; Corrêa, Angelita Duarte; Abreu, Celeste Maria Patto de; Paiva, Luciano Vilela
Inibidores de tripsina representam uma estratégia de controle de insetos e, por isso, a identificação e caracterização desses inibidores são etapas muito importantes para que novas formas de controle de pragas sejam desenvolvidas. Os inibidores de tripsina atuam na digestão primária de proteínas e comprometem o processo digestivo por completo, reduzindo a disponibilidade de aminoácidos ao inseto. A incorporação de inibidores de tripsina na dieta de insetos-praga é uma forma de controle cuja eficácia foi verificada por diferentes autores. Este projeto foi conduzido a fim de se observar a eficiência de extratos de folhas de mamona na inibição “in vitro” de proteinases do tipo tripsina do bicho-mineiro do cafeeiro. Após testes realizados com os extratos de folhas de mamona não-fervidos e fervidos com e sem a adição de -mercaptoetanol 0,2% (v/v) e mediante precipitações com acetona, verificou-se que o inibidor é uma molécula termoresistente e não-protéica. Desta forma, iniciou-se um processo de purificação da molécula inibidora por meio de cromatografia de adsorção com posterior análise em espectrômetro de massas. Os resultados dos testes de inibição indicaram a presença de um inibidor de tripsina eficaz contra o bicho-mineiro do cafeeiro nos extratos de folhas de mamona capaz de inibir 2,48 + 0,15 UTI, o que representa aproximadamente 40% de inibição. Em testes realizados com tripsina bovina observou-se que o extrato de folhas de mamona não apresenta poder de inibição sobre essa enzima.